細(xì)胞凍存液氮罐的具體操作步驟和細(xì)胞復(fù)蘇流程

　　大量細(xì)胞如何儲(chǔ)存在液氮罐里，液氮罐里一般灌有低溫液氮，細(xì)胞的儲(chǔ)存需要低溫環(huán)境，放入-196度的液氮里對(duì)細(xì)胞是長(zhǎng)期保存的一個(gè)適合的環(huán)境。細(xì)胞凍存液氮罐是將細(xì)胞存入液氮罐的液相里儲(chǔ)存，有專(zhuān)用的方形抽屜式提籃，2ml凍存管放入凍存盒然后再放入提籃后浸入液氮里，*浸入。使細(xì)胞*處于液氮-196度環(huán)境下，才能夠長(zhǎng)期保存細(xì)胞。

　　細(xì)胞凍存液氮罐的具體操作步驟：

　　1、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中細(xì)胞按常規(guī)方法消化，或分離獲得原代細(xì)胞后，收集于離心管中。

　　2、使用離心機(jī)離心，去除上清，收集細(xì)胞沉淀。

　　3、根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)密度加入適量的LiveCyteTM細(xì)胞凍存液進(jìn)行重懸，充分混勻。

　　4、將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中，直接放置于-80°C冰箱保存。24小時(shí)后可移入液氮長(zhǎng)期保存(可選)。

　　細(xì)胞凍存液氮罐的細(xì)胞復(fù)蘇流程：

　　1、從-80°C冰箱或液氮罐中取出細(xì)胞。

　　2、迅速放入37°C水浴，并不時(shí)搖動(dòng)，在3分鐘之內(nèi)使其*融化。

　　3、在凍存管中加入少量*培養(yǎng)基，再將細(xì)胞混合液移入含有該細(xì)胞*培養(yǎng)基的離心管中，樣品和培養(yǎng)基比例為1：10，然后輕輕吹打，混合均勻。

　　4、離心后去除上清，收集細(xì)胞沉淀。

　　5、輕輕彈松細(xì)胞沉淀，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，輕輕晃動(dòng)使細(xì)胞分布均勻，置于37℃孵箱中培養(yǎng)。